分 離 純 化

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含有(you)(you)一種以上的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)培(pei)養物(wu)(wu)(wu)(wu)稱為混和培(pei)養物(wu)(wu)(wu)(wu)（mixed culture）。如(ru)果在一個(ge)菌(jun)落中所有(you)(you)細胞均來(lai)自(zi)于(yu)一個(ge)親代細胞，那么這個(ge)菌(jun)落稱為純培(pei)養（pureculture）。在進(jin)行菌(jun)種鑒定時，所用的(de)微(wei)生(sheng)物(wu)(wu)(wu)(wu)一般(ban)均要(yao)求為純的(de)培(pei)養物(wu)(wu)(wu)(wu)。得到純培(pei)養的(de)過程稱為分(fen)離純化(hua)，方法有(you)(you)許(xu)多(duo)種。

１、傾注平板法

首先把(ba)微生物懸(xuan)液(ye)(ye)通過一系列稀釋，取一定量的稀釋液(ye)(ye)與熔(rong)化(hua)好的保持在40-50°左右的營養瓊(qiong)脂培養基充分(fen)混(hun)合，然后(hou)把(ba)這混(hun)合液(ye)(ye)傾注到無菌的培養皿中，待凝固(gu)之后(hou)，把(ba)這平(ping)板倒置在恒箱中培養。單(dan)一細胞經過多(duo)次(ci)增殖后(hou)形成一個(ge)菌落，取單(dan)個(ge)菌落制成懸(xuan)液(ye)(ye)，重復上述步(bu)驟數次(ci)，便可得到純(chun)培養物。

２、涂布平板法

首先把(ba)微生物懸液通過適當的(de)稀釋，取一定量的(de)稀釋液放(fang)在無菌的(de)已(yi)經凝固的(de)營(ying)養瓊(qiong)脂平(ping)板上，然(ran)后用無菌的(de)玻璃(li)刮刀把(ba)稀釋液均勻地涂(tu)布在培養基表面上，經恒溫(wen)培養便可以得到單個菌落。

３、平板劃線法

簡單的(de)(de)分離微生物(wu)的(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)是平板劃(hua)線(xian)法(fa)(fa)。用無菌(jun)的(de)(de)接(jie)種環(huan)(huan)取(qu)培(pei)養物(wu)少(shao)許(xu)在平板上進行劃(hua)線(xian)。劃(hua)線(xian)的(de)(de)方(fang)法(fa)(fa)很多，常(chang)見(jian)的(de)(de)比較容易出現(xian)單個(ge)(ge)菌(jun)落的(de)(de)劃(hua)線(xian)方(fang)法(fa)(fa)有斜線(xian)法(fa)(fa)、曲線(xian)法(fa)(fa)、方(fang)格法(fa)(fa)、放射法(fa)(fa)、四(si)格法(fa)(fa)等。當接(jie)種環(huan)(huan)在培(pei)養基表(biao)面上往后(hou)移動(dong)時，接(jie)種環(huan)(huan)上的(de)(de)菌(jun)液逐(zhu)漸(jian)稀釋，最后(hou)在所劃(hua)的(de)(de)線(xian)上分散著(zhu)單個(ge)(ge)細胞，經(jing)培(pei)養，每(mei)一(yi)個(ge)(ge)細胞長成一(yi)個(ge)(ge)菌(jun)落。

４、富集培養法

富集培養(yang)法的(de)(de)方法和原理非(fei)常(chang)簡(jian)單。我們(men)可以創(chuang)造一些條(tiao)件只(zhi)讓(rang)所需的(de)(de)微(wei)(wei)生(sheng)物生(sheng)長(chang)，在這些條(tiao)件下，所需要的(de)(de)微(wei)(wei)生(sheng)物能有效(xiao)地與其(qi)(qi)他微(wei)(wei)生(sheng)物進(jin)行競爭，在生(sheng)長(chang)能力(li)方面遠遠超(chao)過(guo)其(qi)(qi)他微(wei)(wei)生(sheng)物。如果要分離一些專(zhuan)性寄生(sheng)菌，就必須把樣品接(jie)種到(dao)相應(ying)敏感宿主細胞群體中，使其(qi)(qi)大(da)量生(sheng)長(chang)。通過(guo)多次重(zhong)復移種便可以得(de)到(dao)純的(de)(de)寄生(sheng)菌。

５、厭氧法

在(zai)實驗室中(zhong)，為了分(fen)離某些厭(yan)氧菌(jun)，可以(yi)(yi)利(li)用裝有(you)原(yuan)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)試(shi)管作為培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)容器，把這支試(shi)管放(fang)在(zai)沸水浴(yu)中(zhong)加(jia)熱數分(fen)鐘，以(yi)(yi)便逐(zhu)出培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)中(zhong)的(de)(de)溶解氧。然后(hou)快速冷(leng)卻(que)，并進行接(jie)(jie)種(zhong)。接(jie)(jie)種(zhong)后(hou)，加(jia)入無菌(jun)的(de)(de)石蠟(la)于(yu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)表面，使培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)與空氣隔(ge)絕。另一種(zhong)方(fang)法(fa)是，在(zai)接(jie)(jie)種(zhong)后(hou)，利(li)用N2或(huo)CO2取代(dai)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)中(zhong)的(de)(de)氣體，然后(hou)在(zai)火(huo)焰上把試(shi)管口密(mi)(mi)封。有(you)時為了更(geng)有(you)效地分(fen)離某些厭(yan)氧菌(jun)，可以(yi)(yi)把所(suo)分(fen)離的(de)(de)樣品接(jie)(jie)種(zhong)于(yu)培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)基(ji)上，然后(hou)再(zai)把培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)皿放(fang)在(zai)*密(mi)(mi)封的(de)(de)厭(yan)氧培(pei)(pei)養(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)裝置中(zhong)。

6、單細胞（或單孢(bao)子）分(fen)離法

是采取(qu)(qu)顯微分(fen)離(li)法從(cong)混雜(za)群體中直(zhi)接分(fen)離(li)單個細胞或單個個體進行培養以獲得(de)純(chun)培養。較(jiao)大的微生物，可采用(yong)毛細管提取(qu)(qu)單個個體。個體相對(dui)較(jiao)小(xiao)的微生物，需采用(yong)顯微操作儀，在(zai)顯微鏡下用(yong)毛細管或顯微針、鉤、環等挑取(qu)(qu)單個微生物細胞或孢子以獲得(de)純(chun)培養。單細胞分(fen)離(li)法對(dui)操作技術有比較(jiao)高的要求(qiu)。

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